Enews155 運用流式細胞儀及活體細胞影像來觀察細胞特性

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高雄醫學大學研究資源整合發展中心目前有一台12色高階流式細胞儀(BD LSR II),這是第一台可配置四根固定校準、氣冷式雷射的桌上型流式細胞儀,而本中心的LSR II目前配有三根雷射,包含Blue、Red和Violet laser,可同時分析12種不同的螢光參數。
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本校研究資源整合發展中心目前有一台12色高階流式細胞儀(BD LSR II),這是第一台可配置四根固定校準、氣冷式雷射的桌上型流式細胞儀,而本中心的LSR II目前配有三根雷射,包含Blue、Red和Violet laser,可同時分析12種不同的螢光參數。
這台儀器的核心設計主要是以新式數位化數據處理系統,來實現每秒鐘可處理一千萬次的高速分析,同時儀器的革新化脈衝處理技術,可以正確的區分實體組織樣本中聚集細胞群體,來大幅減少偽陽性的產生。
這台儀器的核心設計主要是以新式數位化數據處理系統,來實現每秒鐘可處理一千萬次的高速分析,同時儀器的革新化脈衝處理技術,可以正確的區分實體組織樣本中聚集細胞群體,來大幅減少偽陽性的產生。

當前修訂版本

高雄醫學大學e快報 第155期  研究資源整合發展中心 專題



運用流式細胞儀及活體細胞影像來觀察細胞特性

研究資源整合發展中心李曉婷.邱怡靜


本校研究資源整合發展中心目前有一台12色高階流式細胞儀(BD LSR II),這是第一台可配置四根固定校準、氣冷式雷射的桌上型流式細胞儀,而本中心的LSR II目前配有三根雷射,包含Blue、Red和Violet laser,可同時分析12種不同的螢光參數。

這台儀器的核心設計主要是以新式數位化數據處理系統,來實現每秒鐘可處理一千萬次的高速分析,同時儀器的革新化脈衝處理技術,可以正確的區分實體組織樣本中聚集細胞群體,來大幅減少偽陽性的產生。

目前這台儀器最常運用於免疫細胞分析,如利用結合細胞表面抗原染色、細胞功能分析(例如:cell cycle, apoptosis)及細胞內細胞激素染色,以探討某群細胞之功能,尤其是當這群細胞比例低、不易分離或是in vitro所測功能無法反映in vivo時;也可運用於Signaling molecules之分析,利用帶有螢光之單株抗體分析細胞內之訊息傳遞,可同時偵測12種不同的訊息分子;另外,也可應用於Quantum dots,Quantum dots是特殊材質製成的奈米顆粒,因材質原因,可帶有螢光,與一般螢光染料不同是,其激發波長範圍(在紫光與紫外光間)寬廣,但emission波長很集中,因此不易有不同螢光之間的互相干擾,又因其不同顆粒大小,所發出之螢光波長不同,可以用來做multi- color染色,其應用範圍相當的廣泛。

此外,本中心活體細胞影像實驗室也備有一組 CellR螢光顯微系統及一台正立螢光顯微鏡。CellR除備有5顆高階物鏡(10X-100X)外,另備常用螢光濾片GFP、DAPI、RFP等。細胞樣品在適當處理下,可得到高解析度之螢光影像。CellR除一般倒立螢光顯微鏡功能外,其主要強大的功能為記錄活體細胞的即時影像變化(例如: 鈣離子)。且配置小型細胞培養箱,可控制實驗溫度及CO2比例,供長時間細胞影像記錄使用。正立螢光顯微鏡配備紅外光波段,主要應用於細胞神經生理學實驗。

記錄和觀測活細胞的生理變化已逐漸成為研究主流。至目前發展,利用不同的活細胞用螢光染劑(cell-permanent probe),活細胞影像已廣泛地應用於鈣離子1-2、粒線體3、細胞週期4等研究上。 目前高醫大在活體細胞方面的研究,在影像專家吉岡 亨客座教授的帶領下, 著重於鈣離子影像研究。更有校內研究利用本實驗室資源,著手發表實驗成果於期刊生物醫學。將來,活體細胞影像實驗室期望在現有的技術與資源下,協助更多校內研究者在細胞生物學之研究上有進一步的突破。



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