http://enews2.kmu.edu.tw/index.php?action=history&feed=atom&title=Enews245_%E5%A4%9A%E8%89%B2%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E6%8A%80%E8%A1%93%E7%9A%84%E9%80%B2%E9%9A%8E%E6%87%89%E7%94%A8-II 2026-04-10T02:12:10Z 本站上此頁的修訂歷史 MediaWiki 1.11.1 http://enews2.kmu.edu.tw/index.php?title=Enews245_%E5%A4%9A%E8%89%B2%E6%B5%81%E5%BC%8F%E7%B4%B0%E8%83%9E%E6%8A%80%E8%A1%93%E7%9A%84%E9%80%B2%E9%9A%8E%E6%87%89%E7%94%A8-II&diff=37217&oldid=prev 2014-06-04T08:57:48Z

<p>新頁面: 高雄醫學大學e快報 第245期　 研究資源整合發展中心專題 == '''多色流式細胞技術的進階應用-II''' == 研究資源整合發展中心 孫昭玲組長 ...</p> <p><b>新頁面</b></p><div>高雄醫學大學e快報<br /> 第245期　<br /> 研究資源整合發展中心專題<br /> <br /> <br /> <br /> == '''多色流式細胞技術的進階應用-II''' ==<br /> <br /> 研究資源整合發展中心 孫昭玲組長<br /> <br /> <br /> 本校研資中心自96年度購入多色流式細胞儀後，自此本校生醫研究進入多「彩」多姿的世界，多色流式細胞技術廣泛應用於細胞生物學與醫學領域之研究，本人已於上次e快報中介紹三種進階應用，這次將介紹另外流式細胞技術需要注意的實驗技巧，給高醫研究人員參考，希冀能提升高醫之研究能量。<br /> 本校多色流式細胞儀配備有三支雷射光，分別是藍光（488 nm laser）、紅光（633 nm）、及紫光（405 nm）雷射，其中藍光雷射激發後可以收集六個波段的可見光，紅光與紫光雷射激發後，分別各收集三個波段的光譜，因此共可偵測十二個顏色的光譜。<br /> <br /> <br /> 一、螢光物質的選擇<br /> <br /> 選擇螢光物質時，只要注意該螢光物質，是否能被其中一種雷射激發，激發後發射出的光譜是否位在偵測器範圍內，就可以判斷可否使用該螢光物質作實驗了， 為了方便使用者，研資中心已將十二個偵測器與其能夠使用的螢光物質列表（表一），以利使用者設計實驗，例如：APC螢光是由633nm雷射激發，其偵測器編號D，會收集660±20 nm的光波，因此APC可以用於本校的LSRII。這些相關訊息皆放在網站上[http://crrd.kmu.edu.tw/front/bin/ptdetail.phtml?Part=11100002]。另外，多種螢光抗體一起使用時，也需要注意光譜重疊的情形，如圖一，例如PE-Cy5與PerCP的放射光譜重疊部分太多 不宜一起使用，反之，PE-Cy5與PE-Cy7可以一起搭配使用。<br /> <br /> <br /> [[Image:多色流式細胞技術的進階應用(140604)-Table1.jpg|500px]]<br /> <br /> <br /> 二、抗體與螢光物質的搭配<br /> <br /> 確定好螢光染劑後，還須搭配正確的單株抗體，才能實驗成功，主要的搭配原則是：螢光亮的染劑，搭配表現量低的分子（單株抗體），而螢光暗的染劑，搭配表現量高的分子；另外，如果要偵測的分子位於細胞內，則螢光染劑選擇亮的實驗效果較好。目前常用較亮的螢光染劑是PE與APC，而FITC染劑雖沒有前二者來得亮，但不易與其它染劑有顏色上的干擾，因此也常運用於實驗上。<br /> <br /> <br /> [[Image:多色流式細胞技術的進階應用(140604)-圖一.jpg|500px]]<br /> <br /> <br /> 三、去除死細胞的干擾<br /> <br /> 對於比例低的（&lt;10%）的陽性細胞（被螢光抗體染上的細胞），需要去除死細胞的干擾，所得比例才會精準，因為死細胞通常會與單株抗體做非特異性結合（如圖二A紅色圈選處），造成偽陽性的訊號，因此可以利用與死細胞結合的染劑，例如：PI或是7-AAD，先將死細胞圈選除外後，再分析螢光抗體陽性的細胞比例（如圖二B），數值才會正確；其中選擇7-AAD比選擇PI為佳，因為PI的放射光譜範圍廣，比較容易干擾到別的顏色，例如：PI會干擾PE的顏色，因此二者不能共用。<br /> <br /> [[Image:多色流式細胞技術的進階應用(140604)-圖二.jpg|500px]]<br /> <br /> <br /> <br /> [[enews245]]<br /> <br /> [[Category:國際事務中心專題]]</div>

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